FACS-Analytics and Cell Sorting|PD Dr. Petra Hoffmann
Die 'Central FACS Facility' (CFF) des RCI bietet Arbeitsgruppen des Universitätsklinikums Regensburg (UKR) und der Universität Regensburg (UR) die Möglichkeit, einzelne Zellpopulationen zu identifizieren und zu charakterisieren sowie gezielt zu isolieren und so für weitere Analyseprozesse zugänglich zu machen. Darüber hinaus bieten wir mit unserem Fachwissen Einsteigern und Fortgeschrittenen beratende Unterstützung bei durchflusszytometrischen Fragestellungen und Problemen, wie z.B. der Wahl des geeigneten Fluorochroms, dem Erstellen eines Färbepanels für die Vielfarbenanalyse oder der Optimierung von Gating Strategien.
Die CFF ist mit einem BD FACSAria™ IIu und einem BD FACSAria™ Fusion Highspeed Zellsorter ausgestattet, die beide auf Operator Basis betrieben werden. Desweiteren stehen mehrere Analysegeräte zur Verfügung: ein BD LSR II™, ein BD FACSLyric™, ein BD Celesta™ (ab Februear '20) und ein BD FACSCalibur™. Ab März '20 bietet die CFF nach entsprechendem Training auch Zugang zu einem 30-Parameter FACSymphony™ Analysegerät inkl. Hochdurchsatz-Probenverarbeitung.
Am FACSAria™ IIu Zellsorter können maximal 9 verschiedene Fluorochrome (+ FSc/SSc) für die Identifizierung und Isolierung genutzt werden, am FACSAria™ Fusion maximal 18 verschiedene Parameter (+ FSc/SSc). An beiden Geräten können jeweils bis zu vier verschiedene Populationen simultan aus einer Probe isoliert werden. Die maximale Sortgeschwindigkeit beträgt 70.000 events/sec. Darüberhinaus bietet die CFF die Möglichkeit des 'index sortings' sowie der Sortierung und Ablage - auch von Einzelzellen - in verschiedene Mikrotiterplattenformate. Beide Zellsorter stehen im S2 Bereich, der FACSAria™ Fusion ist außdem in eine Sterilbank verbaut, weshalb nach vorheriger Absprache auch Proben bis zur Sicherheitsstufe S2 (Gentechnik und Bio Gefahrenstoffe) angenommen werden können. Nach jedem Sort erfolgt eine Reanalyse der isolierten Population(en) am Gerät sowie der Ausdruck eines Sortreports. Alle FCS Files eines Sorts werden in der CFF gespeichert und in Kopie den Nutzern zur Verfügung gestellt.
Alle weiteren Details entnehmen Sie bitte den einzelnen Untermenüpunkten.
Alle weiteren Details, Kontaktdaten und Hinweise für Erstnutzer
User guide
New Users
- To schedule your sort appointments call 944-5549 ( R. Eder or I. Fink) at least ONE WEEK prior to intended sort date
- Appointments can be booked Monday to Friday between 8 am and 4 pm (other times upon request)
- If possible provide a flow cytometric analysis of the intended sort material (or one as similar as possible) prior to the first sort date
- Fill out the FACS Questionnaire (see 'Useful Links') and bring it with you on the sort day (do not forget to provide a signature from your PI)
- If you are late for your appointment please give us a call (lab: 944-5549 or at the sorter: 944-5482). Delay may result in reduced time for sorting
- Please provide a telephone number for contact on the sort day
Cell Sorting - Sample Requirements
- Ideal cell concentration for most sorting material: 20 x 10e6 cells/ml
- Minimum sample volume: 0,5 ml
- Sorting material must be prepared and kept under sterile conditions (exceptions only upon prior request)
- Cells must be resuspended in sterile PBS (addition of serum/protein possible; please consult operators) and filtered immediately before sorting (≤ 40µm)
- PLEASE NOTE: Safety level S1 material (genetic engineering and biohazard) can be sorted without prior notice. Upon special request and ONLY AFTER PRIOR CONSULTATION we might be able to sort material with biohazard level S2.
Data Management
- all data acquired during sorting is automatically saved on a local hard drive
- a safety copy will periodically be made on an external hard drive
- all users are recommended to store their personal data additionally on their own device
Useful Links
Information
Instruments & Locations
BD FACSAria™ IIu
- high speed sorting(max 70.000 events/s)
- 3 laser / max 9 different colours & FSc/SSc
- one- to four-way bulk sorting devices for a variety of tube sizes (50 ml,15 ml,5 ml; Microtubes)
- BD™ Automated Cell Deposition Unit (ACDU) for sorting to Multiwell plates (24-, 48-, 96-well plates; bulk or single cell deposit)
Location
Central FACS Facility
Building D5/ Ground Floor
Room 3.120
Phone: 944-38191
BD FACSAria™ Fusion
- high speed sorting (max 70.000 events/s)
- 5 laser / max 18 different colours & FSc/SSc
- one- to four-way bulk sorting devices for a variety of tube sizes (50 ml,15 ml,5 ml; Microtubes)
- BD™ Automated Cell Deposition Unit (ACDU) for sorting to Multiwell plates (24-, 48-, 96-well plates; bulk or single cell deposit)
- Sort Collection Cooling (Water recirculator for refrigeration or heating)
- Integrated Biosafety Cabinet (BSC)
Location
Central FACS Facility
Building D5/ Ground Floor
Room 3.120
Phone: 944-38191
BD FACSCalibur™
- 2 laser / max. 4 different colours & FSc/SSc
- Data acquisition via BD CellQuest Pro
Location
Central FACS Facility
Building D5/ 1st Floor
Room 4.120
Phone: 944-38192
BD FACSCelesta™
- 3 laser/ max. 12 different colours & FSc/SSc
- Data acquisition via BD FACS Diva Software
Location
Central FACS Facility
Building D5/ 1st Floor
Room 4.120
Phone: 944-38192
BD FACSLyric™
- 3 laser/ max. 10 different colours & FSc/SSc
- Data acquisition via BD FACSuiteTM software
Location
Central FACS Facility
Building D5/ 1st Floor
Room 4.120
Phone: 944-38192
BD FACSymphony™ A5 SORP
- 5 laser / max. 30 different colours & FSc/SSc
- Data acquisition via BD FACS Diva Software
Location
Central FACS Facility
Building D5/ 1st Floor
Room 4.120
Phone: 944-38192
Facility Staff
PD Dr. Petra Hoffmann
Head
Phone: +49 941 944-38492
petra.hoffmann(at)ukr.de
Rüdiger Eder
Chief Operator
Phone: 944-5549
ruediger.eder(at)ukr.de
Jaqueline Dirmeier
Operator in parental leave
Phone: +49 941 944-18493
jaqueline.dirmeier(at)ukr.de
Irina Fink
Operator
Phone: +49 941 944-18493
irina.fink(at)ukr.de
Dr. Michael Delacher
responsible for LSR
Phone: +49 941 944-38125
michael.delacher@ukr.de
Important Contact Information
To schedule an appointment:
- Rüdiger Eder phone: +49 941 944-5549
- Irina Fink phone: +49 941 944-18493
- Jaqueline Dirmeier phone: +49 941 944-18493
- Dr. Michael Delacher phone:+49 941 944-38125
(LSR)
To reach operators during sorting
- Aria phone: +49 941 944-38191
For consulting on
- sample preparation
- multicolour panels (composition/gating/analysis)
- FACS-based assay systems:
Petra Hoffmann phone: +49 941 944-38492
News
Die CFF ist vor kurzem in das Forschungsgebäude D5 umgezogen und befindet sich dort in den Räumen 3.120 (Sorter) und 4.120 (Analysegeräte).